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IM9 人外周血B淋巴細胞

Product Format: a 15 ml centrifuge tube

Culture Properties：懸浮

Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 輕輕吹勻細胞，收集懸液1000rpm(150g左右)離心3min，棄上清；
• 用新的*培養基重懸細胞，均勻分為幾份，接種到新的培養瓶中，并補加足量的*培養基；

（懸浮細胞比較依賴細胞密度，細胞傳代前及傳代后密度不宜過低，過低可能會導致細胞生長緩慢或者死亡。細胞傳代前培養基不能*變黃，不然細胞狀態變差會導致傳代失敗。傳代過程吹打細胞應盡量輕柔，不應吹出過多氣泡。）

• 將細胞放回37度培養箱繼續培養。

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

• 凍存液：92%*培養基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）
• 降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

Tips：

• 細胞經過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰zhuang死亡破碎形成碎片，是正常現象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養基重懸接種到新的培養瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
• 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養基重新接種或傳代。
• 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養（高不超過20%），也可以根據細胞生長狀態，選擇傳代細胞到新的培養瓶中繼續培養。

不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞*漂浮。

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